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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的四種方法

更新時(shí)間:2019-03-14點(diǎn)擊次數(shù):1420

1. 脂質(zhì)體法。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體則不同,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。脂質(zhì)體法始于1987年,此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性大大提高。陽離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性相對較高,對不同的細(xì)胞可能會干擾細(xì)胞的代謝。

2. 電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細(xì)胞,沿細(xì)胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的。電脈沖和場強(qiáng)的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,因?yàn)檫^高的場強(qiáng)和過長的電脈沖時(shí)間會不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說電穿孔法可用于各種細(xì)胞,且不需要另外采購特殊試劑,但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA,因?yàn)榧?xì)胞的死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。

3. 病毒介導(dǎo)的感染。感染需要將目的基因克隆到特定的病毒體系中,經(jīng)過包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的病毒,再進(jìn)行感染。優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率特別高,尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、活體細(xì)胞。缺點(diǎn)是構(gòu)建病毒周期長,環(huán)節(jié)多,易出錯(cuò),費(fèi)用也高。

4,非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 。納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,如Entranster試劑,納米材料,細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高,漸漸成為各大實(shí)驗(yàn)室的轉(zhuǎn)染試劑。

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