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牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用與質(zhì)量要求

更新時(shí)間:2021-06-22點(diǎn)擊次數(shù):1251

       檢查方法:


已證明無外源因子污染的牛細(xì)胞培養(yǎng)物,在細(xì)胞生長(zhǎng)液中加15%待測(cè)血清,連傳3代共21天。陰性對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)液
中加15%已知無病毒污染的牛血清,與試驗(yàn)組同條件下進(jìn)行。在觀察期內(nèi)注意細(xì)胞形態(tài)變化或細(xì)胞病變。在觀察
期內(nèi)第14天待檢樣品和對(duì)照樣品用標(biāo)準(zhǔn)病毒檢測(cè)方法檢查。
如待檢細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)胰酶消化后分種到6個(gè)含蓋玻片的容器內(nèi)。陰性對(duì)照樣品按同樣方法。再將牛腹泄病毒、牛細(xì)
小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸弧病毒分別加入待檢培養(yǎng)物蓋玻片容器內(nèi)作為陽性對(duì)照,再培養(yǎng)7天,用熒光
抗體技術(shù)進(jìn)行檢查。
細(xì)胞病變或病毒引起的其他改變通過蘇木精或伊紅染色進(jìn)行觀察。取另外一個(gè)待檢細(xì)胞培養(yǎng)瓶用人“O”紅細(xì)胞、
豚鼠紅細(xì)胞和新鮮雞紅細(xì)胞作血球吸附病毒檢查。試驗(yàn)在2~8℃和20~24℃進(jìn)行。陰性對(duì)照細(xì)胞預(yù)先感染副流感
Ⅲ型病毒作為陽性對(duì)照。未感染的細(xì)胞作為陰性對(duì)照。
3)內(nèi)毒素檢測(cè)
用鱟試劑檢查。
4)細(xì)菌噬菌體檢查
主要檢查E.Coli(C300 or K-12)噬菌體。
5)激素含量測(cè)定
每批FBS對(duì)某些激素含量都要進(jìn)行測(cè)定,包括:雌二醇、胰島素、孕硐、睪丸素、甲狀腺素等。
6)血紅蛋白檢測(cè)
血紅蛋白與氧合血紅蛋白的比≥70%,血紅蛋白含量≤mg15/dl。
7)細(xì)胞生長(zhǎng)效果測(cè)定
a.細(xì)胞克隆效果測(cè)定
細(xì)胞選擇:Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653
血清濃度與細(xì)胞數(shù):
10%血清/1個(gè)細(xì)胞/孔
4%血清/5個(gè)細(xì)胞/孔
細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640, 96孔培養(yǎng)盤36℃±2℃,5%二氧化碳培養(yǎng)10~
15天。試驗(yàn)中選擇一個(gè)已知參考牛血清作對(duì)照。
克隆效率計(jì)算:
克隆效率=(陽性孔平均數(shù)/ 培養(yǎng)孔總數(shù)) X100% 
相對(duì)克隆效率=待測(cè)血清克隆效率/參考血清克隆效率
b.貼壁效率試驗(yàn):
用人的傳代細(xì)胞作每批血清的貼壁效率試驗(yàn),A549(人肺癌細(xì)胞)該細(xì)胞可以反應(yīng)出低濃度血清的貼壁變化。采
用6孔培養(yǎng)盤每批血清用兩種濃度和兩種不同的細(xì)胞接種數(shù)即10%血清――100細(xì)胞/孔,4%血清200介細(xì)胞/孔
。放36℃±2℃,濕潤(rùn)5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)10~14天,計(jì)算著色細(xì)胞克隆,確定貼壁效率。從這兩種不同血清
濃度來確立實(shí)驗(yàn)血清支持細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的水平,分析兩種試驗(yàn)條件下平均貼壁效率。
貼壁效率(%)=(每孔克隆平均數(shù)/ 每孔活存的培養(yǎng)細(xì)胞平均數(shù)) X100%
相對(duì)貼壁效率=被測(cè)血清貼壁效率/參考血清貼壁效率
c. 二倍體纖維細(xì)胞促生長(zhǎng)試驗(yàn)
人二倍體細(xì)胞株 WI28 MRc5
25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶,5%血清,每瓶接種1.5X105細(xì)胞連傳3代,每代血清濃度和接種細(xì)胞數(shù)相同,每代培養(yǎng)7天,每
代接種二個(gè)細(xì)胞瓶,36℃±2℃培養(yǎng)。以同樣條件用已知參考血清進(jìn)行平行培養(yǎng)。每代收獲細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)算每批待
檢血清與參考血清的相對(duì)生長(zhǎng)率(RGR)。
RGR=(試驗(yàn)血清每瓶細(xì)胞平均數(shù)/ 參考血清每瓶細(xì)胞平均數(shù)) X100%

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