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小量質(zhì)粒DNA的提取之堿裂解法

更新時(shí)間:2024-04-10點(diǎn)擊次數(shù):960

此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下:
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2ml LB培養(yǎng)基
2、37℃振蕩培養(yǎng)箱過(guò)夜
3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液
4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合
5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 
6、加入0.15ml預(yù)冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 
7、以10,000rpm離心20min,取上清液于另一新Ep管
8、加入等體積的異戊醇,混勻后于0℃靜置10min
9、再以10,000rpm離心20min,棄上清
10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次,抽干所有液體
11、待沉淀干燥后,溶于0.05mlTE緩沖液中


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